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油脂中磷脂测定法(GB5537—85)

2022-05-31 9:33:33

油脂中磷脂即由甘油、脂肪酸、磷酸和氨基醇等所组成的复杂化合物。 (一)钼蓝比色法 1.仪器和用具 瓷坩埚或石英坩埚;分光光度计或带塞的50ml比色管;移液管:5、10ml;电炉、高温炉;溶量瓶:100、500、1000ml;表面皿、烧杯、量筒;恒温水浴锅;漏斗、坩埚钳、试剂瓶…

油脂中磷脂即由甘油、脂肪酸、磷酸和氨基醇等所组成的复杂化合物。 
(一)钼蓝比色法 
1.仪器和用具 
瓷坩埚或石英坩埚;分光光度计或带塞的50ml比色管;移液管:5、10ml;电炉、高温炉;溶量瓶:100、500、1000ml;表面皿、烧杯、量筒;恒温水浴锅;漏斗、坩埚钳、试剂瓶等。 
2、试剂 
50%氢氧化钾溶液;盐酸、硫酸、氧化锌、滤纸;0.015%硫酸联氨溶液; 
2.5%钼酸钠稀硫酸溶液:量取140ml硫酸注入300ml水中 ,摇匀,冷却至室温,加入12.5g钼酸钠,溶解后加入水至500ml,摇匀,静置24h备用。 
磷标准溶液:称取无水的磷酸二氢钾0.4391g溶于1000ml水中,作为1号液,含磷0.1mg/ml,吸取1号液10ml,加水稀释至100ml,含磷0.01mg/ml,作为2号液,比色用。 
3.操作方法 
(1)绘制标准曲线:取5只50ml比色管,编成1,2,4,6,8五个号码,按号码顺序分别注入磷标准2号液1,2,4,6,8ml,再按顺序分别加水9、8、6、4、2ml。 接着向5只管内各加0.015%硫酸联氨溶液8.0ml;各加钼酸钠稀硫酸溶液2.0ml,加塞、摇匀。去塞,将5只管置于正在沸腾的水浴中加热10min,取出冷却至室温,用水稀释至50ml,充分摇匀,经10min后,用分光光度计在波长650nm下,用3cm液槽,用水调整零点,分别测定消化值。以消化值为纵坐标,以磷量(0.01、0.02、0.04、0.06、0.08mg)为横坐标绘制标准曲线。 
(2)制备被测液:用坩埚称取试样约10g(准确至0.001g),加氧化锌0.5g,先在电炉上加热炭化,然后送入550~600℃的高温炉中灼烧至灰化(白色),灼烧时间约2h,取出坩埚冷却至室温,用热盐酸(1:1)10ml溶结灰分,并加热微沸5min,将溶解液过滤注入100ml容量瓶中,用热水冲洗坩埚和滤纸,待滤液冷却至室温后,用50%氢氧化钾溶液中和至出现混浊,缓慢滴加盐酸使氧化锌沉淀全部溶解后,再滴2滴,最后用水稀释至刻度,摇匀。 
(3)比色:用移液管吸取被测液10ml注入50ml比色管中,加入0.015%硫酸联氨8.0ml,加2.0ml钼酸钠稀硫酸溶液、加塞,将比色管置于正在沸腾的水浴中加热10min,取出冷却至室温,用水稀释至50ml,充分摇匀,经10min后,用分光光度计在波长650nm下,用3cm液槽,用水调整零点,测定消光值。 
4.结果计算 
根据被测液的消光值,从标准曲线查得磷量(P),按公式3—33计算磷脂含量: 
磷脂(%)=p×V2 / V1 ×26.31×100 / W×1000 (3—33) 
式中:P—标准曲线差得的磷量,mg; v2—样品灰化后稀释的体积,ml; 
V1—比色时所取的被测液体积,ml;26.31—每毫克磷相当于磷脂的毫克数;W—试样重量,g。 
双试验结果允许差不超过0.04%,求其平均数,即为测定结果。测定结果取小数点后第二位。 
(二) 重量法 
1.仪器和用具 
玻璃漏斗、漏斗架;烧杯:100ml; 锥形平、滤纸等。 
2.试剂 
丙酮 
3.操作方法 
取混匀的样品约100ml,加热约90℃时进行过滤。用烧杯称取试样25g,加热至80℃,加水2~2.5ml,充分搅拌使之水化,在室温下静置过夜,或进行离心沉淀,倾出上层清液,用已知恒重的滤纸(或用抽装置抽滤)进行过滤,待滤液全部滤出后,用冷的丙酮把杯内残留的沉淀冲洗入滤纸中,继续用水调整零点,测定消光值。 
4.结果计算 
重量法测定磷脂含量按公式3—34计算: 
磷脂(%)=W1 / W ×100 式中:W1—沉淀物重,g;W—试样重量,g。 
双试验结果允许差不超过0.04%,求其平均数,即为测定结果。测定结果取小数点后第二位。

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